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大家好,这里是专注表观组学十余年,领跑多组学科研服务的易基因。
总体来说,DNA甲基化一般遵循三个步骤进行数据挖掘。
首先,进行整体全基因组甲基化变化的分析,包括平均甲基化水平变化、甲基化水平分布变化、降维分析、聚类分析、相关性分析等。
(相关资料图)
其次,进行甲基化差异水平分析,筛选具体差异基因,包括DMC/DMR/DMG鉴定、DMC/DMR在基因组元件上的分布、DMC/DMR的TF结合分析、时序甲基化数据的分析策略、DMG的功能分析等。
最后,将甲基化组学&转录组学关联分析,包括Meta genes整体关联、DMG-DEG对应关联、网络关联等。
一、甲基化图谱分析
(1)平均甲基化水平的比较
- 平均甲基化水平能反应样本整体的甲基化水平。
- 但是平均水平差异不大并不能说明样本间甲基化图谱没有差异。
(2)CG/CHG/CHH甲基化水平分布
- 不同物种中,甲基化修饰可能倾向于发生在不同类型的C位点上,该分析有助于反应甲基化发生位点类型的偏好性。
- 甲基化水平分布的组间比较,能够更进一步了解组间甲基化水平的变化。
- 不同基因组元件(CGI相关元件、重复序列元件、基因元件等)的甲基化水平分布规律不同。特别是在不同物种中,基因元件的甲基化水平可能有一定的特点。
- 比较特定元件甲基化水平的组间差异也能发现潜在的功能差异。
(3)降维分析
降维分析尝试找到最能反映数据点真实分布情况的两个维度,以方便对数据进行直观把握。一般采用共同覆盖的5×以上位点进行分析:
- 主成分分析(PCA)
- 非度量多维标度法(NMDS)
- 主坐标分析(PCoA)
可采用统计检验分析组间差异的显著性:
- 相似性分析(ANOSIM)
- 置换多元方差分析(ADONIS)
(4)聚类分析
- 聚类分析考虑的是各样本之间的距离,即不相似性。一般采用共同覆盖的5×以上位点进行分析。
- 与降维分析的差别在于,聚类分析更真实地反映样本的差距,而非仅考虑两个代表性维度。
(5)相关性分析
- 相关性分析考虑的是各样本之间的相似性。一般采用共同覆盖的5×以上位点进行分析。
- 一般采用皮尔森相关系数
二、差异甲基化位点/区域分析DMC/DMR分析)
(1)DMC/DMR鉴定
- 差异甲基化位点:DMC
- 差异甲基化区域:DMR
(甲基化位点一般是与附近的位点一起起作用的)
- 鉴定实验组与对照组甲基化图谱的具体差异。
- 如果实验设计包括多个时间节点,也可以比较相邻时间节点/感兴趣的时间节点之间的甲基化图谱的差异。
(2)DMC/DMR转录因子结合分析(TF binding motif )
主要关注Promoter和Enhancer等调控区域DMC/DMR的TF结合位点。
(3)时序甲基化数据的分析策略(Time Course)
- 比较相邻时间点的差异
- 直接筛选时间阶段相关的DMC和DMR
- 线性模型/混合线性模型
(可以排除混杂因素干扰,如性别)
- 共甲基化模式分析(阶段特异性Cluster筛选)
- WGCNA(权重基因共表达网络分析)
- MEGENA(多尺度嵌入式基因共表达网络分析)
- mfuzz
- ... ...
(4)DMC/DMR在基因元件上的分布
- TE(转座元件):影响基因组稳定性
- Promoter:影响基因表达
- Genebody
(5)差异甲基化基因集(DMGs)的功能分析
分析策略:
- 可以分为Hyper-DMG和Hypo-DMG
- 可以分为Promoter-DMG和Genebody-DMG
- Gene Ontology
- KEGG pathway
- Reactome pathway
- DisGeNET disease
- Disease Ontology
三、组学关联分析:甲基化组学&转录组学
(1)Meta genes整体关联
- 同一样本/组别内,所有基因的表达水平与对应基因的甲基化水平进行关联。
- 研究的是基因甲基化与表达的整体关系。
(2)DMG-DEG对应关联
- 重叠分析:特点:简单粗暴,也适用于样本量少的情况。分析结果:韦恩图。
- 皮尔森/斯皮尔曼相关性分析特点:准确计算相关性程度(R值),及其显著性(p值)。分析结果:散点图(+拟合线);相关性热图
(3)网络关联基于基因表达具有功能和通路的富集性。有最低样本数量要求。
- 共表达-共甲基化网络关联:
- WGCNA module correlation
- EMDN algorithm
- 融合网络关联:
- SNF algorithm
以上就是关于DNA甲基化测序的数据挖掘思路分享,易基因科技提供全面的DNA甲基化研究整体解决方案,技术详情了解请致电易基因0755-28317900。
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